本文使用了Absin的absAnnexinV-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒产品
概述宿主细胞通过先天免疫激活共同调节其代谢，以对抗病*感染。本文揭示了丝氨酸代谢在阻断抗病*天然免疫中的关键作用，并表明丝氨酸代谢缺陷降低SAM介导的H3K27me3并促进ATP6V0d2表达，以增强YAP溶酶体降解和病*诱导的IFN-b产生。
研究背景先天免疫是宿主抵御微生物感染的第一道重要防线。宿主细胞通过不同类型的模式识别受体（PRR）识别病*RNA和DNA，包括Toll样受体（TLR）、维甲酸诱导基因I（RIG-I）样受体和双链DNA的胞浆传感器。PRR然后招募衔接蛋白，如TRIF、MAVS和STING，以激活TBK1和/或IKKε激酶。TBK1/IKKε磷酸化IRF3和核因子κb（NF-kB）以诱导其核移位和随后的I型干扰素（IFN）（包括IFN-a和IFN-b）和炎性细胞因子的转录。在与IFN受体结合后，I型IFN激活JAK-STAT信号并促进IFN刺激基因的表达，以对抗病*感染并协调适应性免疫。在从头合成过程中，糖酵解衍生的3-PG可通过一系列酶促反应最终转化为丝氨酸，其第一个关键步骤由磷酸甘油酯催化脱氢酶（PHGDH）。丝氨酸促进单碳代谢，包括相互连接的代谢途径网络，促进单碳单位的转移，以生物合成核苷酸、S-腺苷甲硫氨酸（SAM）、还原烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸和谷胱甘肽（GSH）。丝氨酸衍生的单碳代谢支持癌症和T细胞增殖的核苷酸合成。此外，丝氨酸通过单碳代谢促进脂多糖（LPS）介导的巨噬细胞内GSH合成或SAM介导的组蛋白甲基化产生白细胞介素（IL）-1b。然而，PHGDH介导的丝氨酸合成途径（SSP）或外源性丝氨酸是否参与抗病*天然免疫仍不清楚。液泡型H+腺苷三磷酸酶（V-ATP酶）是一种依赖ATP的质子泵，由水解ATP的外围V1结构域和转运质子的整合结构域组成。V-ATP酶定位于多种细胞膜上，酸化细胞内的腔室，包括内质体和溶酶体。V-ATP酶或其亚单位ATP6V0d2参与调节多种生物过程，包括蛋白质降解、促进病*融合或消除细菌感染。然而，V-ATP酶在抗病*免疫中的作用目前尚不清楚。Hippo通路在器官大小控制和组织内环境稳定中起着关键作用。当该途径被激活时，Lats1/2激酶磷酸化YAP/TAZ，将其保留在细胞质中进行泛素化和降解。否则，YAP/TAZ进入细胞核并结合TEDD家族转录因子诱导基因转录。最近的一项研究表明，在病*感染后，YAP可以阻止IRF3的二聚化，并防止IRF3易位到细胞核（Wang等人，年）。同时，病*激活的IKKε可以磷酸化YAP，促进其溶酶体降解，缓解YAP介导的IFN-b产生抑制（Wang等人，）。血清饥饿可通过Lats1/2激酶使YAP/TAZ失活，从而减弱YAP介导的TBK1抑制并增强抗病*IFN-b反应。然而，目前还不清楚颗粒代谢途径是否能与HippoYAP途径沟通以调节抗病*天然免疫。
文中所用实验方法质粒与转染酶联免疫吸附试验（ELISA）和丝氨酸测量蛋白分离及免疫印迹分析RNA提取、RT-PCR和RNA序列分析病*体内感染肺组织学病*感染和菌斑试验荧光素酶报告试验代谢物的BLC-MS分析染色质免疫沉淀（芯片）流式细胞术
文章分为6个研究部分
PHGDH通过抑制TBK1-IRF3轴负性调节IFN-b信号
丝氨酸代谢拮抗病*诱导的IFN-b产生
丝氨酸代谢缺陷保护小鼠免受病*感染
来自丝氨酸代谢的SAM损害IFN-b的产生
PHGDH通过下调ATP6V0d2部分抑制IFN-b的产生
ATP6V0d2在病*感染时通过促进YAP的溶酶体降解诱导IFN-b产生
研究结论丝氨酸代谢对抗病*天然免疫的影响。首先，我们表明，病*感染后，小鼠巨噬菌体和HEKT细胞的从头丝氨酸生物合成途径明显下调。通过基因调控或使用抑制剂CBR-治疗，靶向SSP中的关键酶PHGDH的活性，在体外和体内有力地增强IFN-b介导的抗病*天然免疫。此外，外源性丝氨酸和甘氨酸限制也通过在体外和体内增强IFN-b来减轻病*感染。在机制上，我们发现抑制内源性和外源性丝氨酸代谢通过降低SAM介导的H3K27me3促进ATP6V0d2的表达。ATP6V0d2针对YAP进行溶酶体降解，以减弱YAP介导的对TBK1-IRF3轴的抑制，并增强IFN-b介导的抗病*天然免疫。综上所述，我们的发现不仅阐明了磷酸脱氢酶（PHGDH）/丝氨酸在控制抗病*信号通路中发挥关键作用的一种以前未知的机制，而且还提出了操纵丝氨酸代谢作为一种潜在的抗病*治疗方法。
文中所用流式细胞：收集并过滤Phgdhfl/flLyz2Cre+和Phgdhfl/flLyz2Cre-小鼠的腹腔巨噬细胞，以制备单细胞悬浮液。为了检测两种小鼠基因型中腹腔巨噬细胞的分化和数量，用含有1%FBS的冰冷PBS清洗细胞，与APC抗小鼠CD11b抗体和PE/Cyanine5抗小鼠F4/80抗体在冰上孵育15分钟，然后使用数字BD口径流式细胞仪（BDBiosciences）进行FACS。用碘化丙啶和Annexin-V-FITC（Absin）对感染SeV的腹腔巨噬细胞进行凋亡检测。通过流式细胞术获取数据，并使用FlowJo（TreeStar）进行分析。
用PI和膜联蛋白V染色分析SeV感染小鼠PMs6h后的细胞凋亡。
文章中使用Absin产品